磷酸化抗體制備

磷酸化抗體制備：

      蛋白可逆性磷酸化調節(jié)是生物體內存在的普遍的調節(jié)方式，幾乎涵蓋生物體內所有的生理、病理過程：糖原的分解與代謝、動植物光合作用、基因的變異、神經遞質的合成與釋放、腫瘤基因的變異等，蛋白磷酸化的調節(jié)在細胞信號傳導及凋亡過程中起到了很重要的作用，是維系細胞生命的活動調控中樞。
      磷酸化抗體可以識別蛋白質的磷酸化或者非磷酸化的存在形式，對磷酸化蛋白進行定性、定量分析，為研究磷酸化蛋白的科研工作者，提供更加方便快捷可靠的服務。
      近年來，隨著對蛋白質科學研究步伐的加快，使用磷酸化抗體的學者明顯增多，尤其是在細胞信號傳導及凋亡的研究過程中受到重視。我公司除有計劃、有重點的開發(fā)一些磷酸化抗體外，對需要其他磷酸化抗體的研究人員和課題進行磷酸化抗體提供制備服務。

磷酸化抗體實驗方案：

      為客戶合成磷酸化多肽和非磷酸化多肽各一條，二者的差別僅為其中某一個氨基酸的磷酸化與非磷酸化，其余序列完全一樣。磷酸化多肽與KLH偶聯物作為免疫原免疫新西蘭大白兔2只， 4次免疫得到的抗血清經ELISA檢測效價達到要求即采血分離、收集抗血清�？寡�清在經過預純化后上磷酸化多肽交聯的親和層析柱純化，得到的抗體再經非磷酸化多肽交聯的親和層析柱吸收。得到的抗磷酸化抗體經BSA交聯的磷酸化多肽與非磷酸化多肽的雙重檢測確認，質量合格，最終交付給客戶。

服務指南：
1、輔助抗原設計包括在服務中不額外收費；
2、一般說來45-55mg多肽用于合成（達到免疫純度標準）；
3、客戶將收到整個過程所有剩余的多肽；
4、一般會在多肽的N或C端增加一個半胱氨酸（如果沒有內部半胱氨酸存在于序列）為了連接于載體蛋白，不額外收費；
5、25ml第三次采集的血清會首先通過非磷酸化親和層析柱以除去識別非磷酸化蛋白的抗體；
6、25ml第三次采集的血清會再通過磷酸化親和層析柱以分離出僅識別磷酸化蛋白的抗體；
7、兩種親和層析柱（磷酸化和非磷酸化）包括在服務中，其他額外的純化可以在您自己的實驗室進行；
8、25ml抗體血清平均可以獲得2-3mg特異性抗體。